专家共识：人类体外受精胚胎移植实验室规范（2016）

供卵试管婴儿成功率大概可达到85%以上，但是对于高龄女性做试管婴儿是有风险的，可能会降低成功率。生殖中心建议您趁年轻早点做试管。

来自：生殖医学杂志，第 26 卷，第 1 期（2017 年 1 月号）

人体体外受精与胚胎移植实验室操作专家共识（2016）

指南概述

体外受精胚胎移植（IVF-ET）技术在我国大陆已发展了27年。 15年来，这项技术发展迅速，各地建立了一大批生殖中心。 2001年至2003年，卫生部主管部门出台了一系列辅助生殖技术技术规范和管理办法，使该技术得以规范和健康发展。 2005年12月，中华生殖医学会（CSRM）成立，进一步推动了本学科的学术发展。

近年来，中华医学会生殖医学分会专家在临床和检验方面积累了丰富的经验，形成了独到的见解。 为进一步规范试管婴儿实验室操作，为患者提供更好的临床医疗服务，研究团队在国内外已发表文献及国内实验室专家的基础上，参考美国生殖医学会相关指南和欧洲生殖医学学会。 本指南。

由于行业特点，目前国内外临床胚胎学实验室相关指南对大量意见的证据等级较低，或没有循证证据。 因此，根据CSRM指南共识编写手册的分类，本指南为正式的专家共识指南。

本指南适用范围为临床胚胎学家在正式实施IVF-ET技术的生殖中心对不孕症患者进行IVF-ET治疗的人类配子和胚胎操作。 制定本指南的目的是协助各个实验室制定自己的标准操作规程，从而获得更稳定的临床结果并减少错误。

IVF-ET 实验室操作中的关键问题

一、配子和胚胎的整体运行原理

负责试管婴儿实验室管理工作的临床胚胎学家应制定所有配子或胚胎操作的标准操作规程，并应按照标准操作规程对下属临床胚胎学家进行培训。

一切操作方法应简单、安全、可靠。 胚胎培养室还应遵循无菌、无毒、无味、无尘的原则。

新装修的胚胎培养室在投入使用前需要做小鼠胚胎检测商丘供卵试管医院包性别，通过小鼠胚胎检测后方可投入使用。 胚胎培养室还应有UPS电源，保证24h不间断供电。

除冷冻、解冻等特殊操作外，配子或胚胎在操作和观察过程中应保持在37℃的温度和40%～60%的湿度环境中。

试管婴儿实验室的空气质量将显着影响胚胎的发育潜能。 建议采取适当措施改善实验室空气质量，特别是可以去除空气中VOC的净化系统。

所有操作均应遵守无菌原则； 所有配子或胚胎操作都应在100级洁净区进行。

所有配子或胚胎的培养皿、试管等，在放置配子或胚胎前，均应标明患者姓名。 来自两个或更多患者的配子或胚胎不应在同一操作区域同时进行操作。 在处理来自下一位患者的样本之前，应对一名患者的样本进行充分处理并将其放入培养箱或液氮容器中。 在不同容器之间转移配子或胚胎之前，应检查两个容器上的患者姓名标识。

所有与患者配子或胚胎接触的耗材和试剂，必须经过精子存活实验后方可使用，有条件者推荐小鼠胚胎实验。

所有与患者配子或胚胎接触的耗材（培养皿、巴斯德管、吸管、采样头、取卵针、移植管等）只能使用一次，使用后应按医疗废物处理使用。

应对配子或胚胎进行双重检查。

每个具体的操作过程都应保存在纸质和电子记录中私人医院做试管包生男孩，以备将来检查。

详细记录每位患者使用的试剂和耗材的批号。

2.取卵和取卵

IVF 实验室的胚胎学家应在取卵前与临床医生核对患者信息。 临床医生对患者进行取卵时，应同时进行取卵。

由于卵母细胞在体温以下长期保存会导致受精能力下降，非整倍体发生的概率增加，因此应从患者卵巢中抽取的卵泡液，在受精过程中应直接用负压吸引器吸入。取卵过程 在 37°C 恒温试管架上的无菌试管中。 取出的卵泡液应保持在37℃左右，尽快在立体镜下辨认卵丘复合体，轻轻吹洗去除卵丘复合体周围的血液、血块和卵泡液。

本着减少打开培养箱次数，尽量缩短在培养箱外停留时间的原则，将卵丘复合体移入培养箱，记录所用培养基的批号、名称集蛋器和采蛋器的编号专家共识：人类体外受精胚胎移植实验室规范（2016），孵化器的编号，卵冠复合体的形态学评估，以及检查卵子的人的姓名。

3、精液加工

所有患者夫妇在接受试管婴儿治疗前均应进行常规精液分析，分析建议采用世界卫生组织第5版标准。

除特殊情况外，男性配偶应在取卵前2-7天射精一次。 精液采集于无菌、无毒的采精杯中，并在采精杯上标明患者及夫妇的姓名和号码。 采精后尽快将采精杯送到精液处理室，建议1小时内开始处理。

精液处理应在室温下进行。 精液处理的目的是去除精浆和精液中的污染物、杂质和异常精子，使精子容量大。 精液加工过程中，应记录采精方法、精液量、颜色、液化等基本参数。 如在院外采精，或采精过程中出现特殊情况试管移植放入过程，应作详细记录。

目前尚无统一的精液处理方法借卵试管医院哪家好，可根据各中心的经验和精液样本质量选择最优方法。 无论使用何种方法，反复长时间离心都可能对精子造成损害。

处理过程（每步时间、操作人员等）及处理后的精子浓度和活动率应记录存档。

常用的精液处理方法是密度梯度离心法或上游法，但对于浓度极低的精液样本，建议在胞浆内单精子注射（ICSI）授精前仅清洗1-2次。

1、液化不良精液的处理：对于液化不良的精液，建议在离心前用无菌注射器吹混，或用巴斯德吸管反复吹混。 混匀后，让未液化的团块自然沉降，弃去。 然后对样品进行密度梯度离心。

2、上游法：上游法用于处理精液。 建议直接将原始精液样本置于培养基下层，收集上层悬液。 不建议在上游处理前与介质混合和离心。

3、密度梯度离心：与上游精液处理相比，密度梯度离心后的精子回收率更高。 上游法和密度梯度离心法均显着降低了凋亡精子的比例。

4.自然施肥

1、自然受精的施肥时间：注射HCG后38-40小时，受精率比较理想。 加精时试管三代包成功，应由两人核对并记录加精时间和加精量。

获得的施肥率在很宽的浓度范围内是相似的。 在30-50ul液滴中加入5000-10000次施肥，或在1ml培养液中加入150,000-300,000次施肥。 但过高的精子浓度可能会导致多精率增加和培养系统的生化环境下降，因此可能是有害的。

2、精卵共培养时间：常规受精：精卵共培养18-20小时； 短期受精：将精卵共培养时间缩短至1-6小时（短期受精仅指缩短共培养时间，不包括剥离卵丘复合体的卵冠颗粒细胞）。

短期授精缩短精卵共培养时间，可提高临床妊娠率。 在受精周期短的情况下，多原核可能与患者的年龄有关。 多原核发病率对短受精周期临床妊娠结局的影响尚不清楚。 与常规受精相比，短期受精具有更高的可移植胚胎率和优质胚胎率。

5.ICSI

ICSI适应症：除原卫生部发布的《卫生部关于修订人类辅助生殖技术和人类精子库相关技术规范、基本标准和伦理原则的通知》中的适应症外，比例以往试管婴儿中多精子的患者，如果成功率较高，可移植胚胎数量不足，可考虑ICSI再治疗。

ICSI 用解冻的睾丸精子可以获得与新鲜睾丸精子相似的受精结果。

ICSI前，需要用透明质酸酶和机械方法去除颗粒细胞。 在此过程中试管移植放入过程，应尽量减少鸡蛋接触酶的时间。 在机械去除颗粒细胞的过程中，应使用合适口径的巴斯特管以尽量减少吹气。 抽吸的次数，从而减少机械刺激的压力。

透明带明显异常的卵母细胞自然受精能力下降，ICSI授精方式可显着提高受精结果。

常规卵巢刺激后获得的未成熟卵母细胞通常有染色体异常，对这些卵子进行 ICSI 并未显示可改善结果。 如果卵巢刺激后取出的卵母细胞均为心肌梗死期的停滞卵母细胞，则体外成熟培养（IVM）的结果较差。

：部分卵子ICSI（）作为疑似受精困难者的一种选择，在一定程度上防止了试管婴儿完全受精失败。

ICSI操作时可考虑PVP等液体以降低操作难度，但应尽量减少注入卵母细胞的PVP量。

影响ICSI受精率的最重要因素包括：卵母细胞质量和成熟度、精子质量和不动性以及膜破裂。

根据操作者的技能，受精率低或卵母细胞退化率高的最可能原因是卵母细胞质量差或成熟度差。 应尽一切努力选择活动精子在制动后进行注射。 如果制动过程不充分（精子尾部的细胞膜没有破裂），就会影响受精率。

如果所有的精子都是活动的，可以考虑使用睾丸精子，低渗精子，或者在ICSI手术中加入精子激动剂。 ICSI后卵母细胞和精子的情况和操作过程应记录在记录、操作者、使用的培养基和耗材的详细信息中。

6. 早期补救性 ICSI

短期受精结合卵圆形复合体颗粒细胞的早期剥离（早期卵子去除），通过极体放电（卵子活化）来判断受精的发生。 如果精液时间短于 8 小时，治疗性 ICSI 称为早期治疗性 ICSI。

短时间受精（早期取卵）联合早期挽救性ICSI可显着改善常规IVF周期完全受精失败患者的临床结局，早期挽救性ICSI后妊娠和新生儿状况的分娩结局与前者不同ICSI 使用射出的精液后。 统计差异。 早期挽救 ICSI 周期出生的婴儿性别比例无偏，出生体重正常，没有重大出生缺陷。 但目前仍缺乏长期随访结果，临床医生可考虑对此类患者进行短期授精联合早期挽救性ICSI。

7.胚胎培养

常规受精或ICSI后，应更换培养基和培养皿，然后在IVF受精或ICSI后16-18小时观察受精情况，记录原核的形态和数量。

胚胎培养时间点设置：按照2011年版发布的共识（表1）设置胚胎观察时间点。 由于各实验室培养体系不同，操作方法不同，胚胎发育速度不一致。 因此课题组建议各中心根据共识时间点，找出各中心的最佳观察点。

虽然多原核胚胎仍有继续发育甚至妊娠的可能，但多原核胚胎可能引起滋养细胞疾病，不宜用于移植和冷冻。

人类胚胎对外界压力非常敏感，不利的压力会导致细胞代谢异常，影响细胞功能和基因表达。 因此，胚胎体外培养的核心工作应着眼于使胚胎始终处于pH、温度、渗透压等指标适宜的环境中，以利于胚胎的稳定。

胚胎的观察要注意卵裂球的数量、碎片的百分比、细胞大小的均匀性和排列、细胞质的颜色、多核现象等。 建议参考共识中的胚胎评分方法。 对于每个卵裂期胚胎，形态学评分应包括三个方面的信息：卵裂球数量、等级、等级原因。 有关共识中的评级，请参见表 2。

胚胎培养记录中应详细记录所用培养基的品种、批号、培养箱条件、操作人员等情况。

8. 胚胎移植

1、移植胚胎数量：我国卫生行政部门对移植胚胎数量有明确规定。 但对于瘢痕子宫、双子宫等高危患者，会对母婴造成很大的安全隐患，建议进行单胚胎移植。

2.移植胚胎的选择：相对而言，卵裂球的数量比卵裂球的均匀度和胚胎碎片的含量更能预测胚胎的发育能力； 分散的胚胎碎片比集中的胚胎碎片对胚胎着床的影响更大； 卵裂球 多核化的存在与否显着影响胚胎的着床率。 除形态学选育外，测定胚胎氨基酸代谢等生化指标、胚胎分泌的微量HCG等方法也可作为无创选胚手段。

3.移植方法：应使用一次性移植导管。 超声引导移植可实现更精确的手术并确保稳定的妊娠率。 装载转移管时务必仔细检查，并在将装有胚胎的转移管放入患者子宫腔之前仔细检查患者姓名。

4.移植记录：移植记录应详细记录胚胎个数、形态学评分、移植时间、移植时导管插入深度、出血情况、临床医生及临床胚胎学家姓名。

9.囊胚培养

囊胚培养的主要目的是胚胎的自然选择。 对于一些患者，胚泡培养移植可能会提高他们的临床妊娠率。 囊胚培养可以等PGD结果出来，有利于选择移植胚胎。 囊胚培养增加了胚胎体外培养的时间国内借卵助孕包生儿子“冻卵”，也增加了不良因素的风险。

由于囊胚与卵裂期胚胎的营养需求不同，因此在囊胚培养过程中通常采用一些特殊条件。 目前囊胚培养常采用序贯培养基，但这并不是唯一的解决方案。 此外，缺氧培养和集体培养也可能有利于囊胚的形成。 如果进行囊胚培养，应具备良好的培养条件。

目前大多数中心根据囊胚分级方法对形成的囊胚进行分级。 在此基础上，为消除工作人员评分方法的差异，建议采用更细致、客观的评分方法：囊胚膨胀后囊胚腔明显增大，内细胞团和滋养层清晰，而囊胚在这个阶段的发育时间更长，所以这个发育阶段的形态学评分更客观可靠； 可在扩张囊胚中间直径最大的平面（“赤道平面”）和离培养皿最近的囊胚底面聚焦后分别观察滋养细胞和内细胞团。 表 3 显示了扩展胚泡的精细形态学评分标准。

滋养层虽然以后不会发育成胎儿，但其形态对于囊胚的进一步发育和着床非常重要。 D5和D6囊胚均可移植或冷冻，D5囊胚的着床率高于D6囊胚。

不同来源的精子受精形成的胚胎所形成的胚泡比例和质量可能存在差异。 D3的优质胚胎囊胚形成率更高，囊胚质量更好。

囊胚培养转移可能会增加转移取消率。

囊胚培养记录应包括培养箱和培养基的条件，并记录囊胚形成的时间。

10. 配子和胚胎的冷冻

各生殖中心实验室应建立可靠的冷冻保存技术，冷冻过程和液氮罐的存放位置应仔细检查。

冷冻方法：玻璃化卵母细胞、卵裂期胚胎和胚泡的恢复率明显高于程序冷冻，尽管玻璃化使用了更高浓度的冷冻保护剂，可能会带来胚胎毒性技术的风险。 并且从目前国内外获得的短期随访数据来看，移植后出生的玻璃化冷冻胚胎和新生儿出生缺陷无明显增加，体长体重无明显异常。 因此，建议将玻璃化冷冻用于胚胎冷冻。

卵子冷冻：目前卵子冷冻技术还不完全成熟，效率低下。 仅建议因医疗原因无法在取卵当天受精的患者使用。 HCG后36小时取卵，取卵后2小时玻璃化冷冻卵子的回收率明显高于取卵后5-6小时冷冻卵子，因此建议取卵后2小时左右冷冻卵子。

冻融后的卵母细胞，纺锤体在2-3小时内重建，2小时后线粒体膜电位恢复。 因此，建议解冻2-3小时后再进行ICSI。

胚胎冷冻：将剩余的胚胎移植后，可以考虑按照一定的质量标准进行挑选，然后进行胚胎冷冻。 发育过慢或质量差的胚胎，无论是卵裂期胚胎还是囊胚专家共识：人类体外受精胚胎移植实验室规范（2016），解冻后的存活率和着床率都会显着降低。 每个冷冻管的推荐胚胎数量由为移植而解冻的胚胎数量和中心的解冻速度决定。

玻璃化溶液中的平衡时间显着影响胚胎的恢复率和解冻后的发育能力。 平衡时间的长短应与温度相适应：温度越高（37℃），平衡时间越短； 温度越低（“室温”），平衡时间应适当延长。 充分膨胀的囊胚经冻融后成活率较好。 建议在玻璃化之前对这些胚胎进行人工收缩，以排出囊胚腔中的液体。

胚胎复苏后的存活情况，可以根据胚胎的形态和胚胎在连续培养过程中的发育情况来综合判断。 能够进一步发育的胚胎预后良好。 对于卵裂期胚胎试管移植放入过程，如果复苏后部分卵裂球出现破损，说明胚胎发育潜能较差，不利于后续的临床结局。

冷冻记录：应包括冷冻方法、每个容器内的胚胎数量、发育阶段、形态学评分、在液氮容器中的储存位置。

为保证配子或胚胎在冷冻过程中的安全，应监测液氮容器内的液氮液位位置，并建立完善的冷冻管理制度。

11.辅助孵化

辅助孵化对新鲜周期转移的价值一直存在争议，目前的证据不建议对所有转移的胚胎进行辅助孵化。 对于反复着床失败、胚胎质量差、胚胎透明带异常、高龄（>38岁）等临床预后较差的患者，辅助孵化可提高着床率。

延时成像技术观察表明，复苏胚胎（尤其是复苏囊胚）可以有利于辅助孵化后胚胎的后续孵化，但是否对临床结局有改善尚不清楚。 目前胚胎辅助孵化可以考虑激光辅助孵化设备。

指南概要

1.索引

配子和胚胎的一般操作原理； 取卵和卵子选择； 精液处理； 自然受精； ICSI； 早期补救性 ICSI； 胚胎培养； 胚胎移植； 囊胚培养； 配子和胚胎冷冻； 辅助孵化

二、简要说明

IVF 实验室负责人应为所有配子或胚胎操作制定标准操作程序。 采蛋时尽量缩短冠丘复合体在孵化器外的停留时间； 精液处理方法应根据精液的具体情况而定； 自然受精的施肥时间为注射HCG后38-40小时，受精率理想； 精子浓度范围大，获得的受精率相近；

影响ICSI受精率的最重要因素包括：卵母细胞的质量和成熟度、精子质量和固定化、破膜； 短期受精（早期取卵）结合早期挽救 ICSI 对传统的 IVF 周期具有完整的影响。 受精失败患者的临床结局明显改善； 胚胎培养观察应严格按设定时间点进行，D3胚胎卵裂球数量比卵裂球均匀度和胚胎碎片含量更能预测胚胎的发育能力；

囊胚培养的主要目的是对胚胎进行自然选择； 滋养层虽然以后不会发育成胎儿，但其形态对囊胚的进一步发育和着床非常重要； 玻璃化卵母细胞、卵裂期胚胎和囊胚的复苏率明显优于程序冷冻技术； 辅助孵化在新鲜胚胎移植中的价值一直存在争议，复苏胚胎移植可能会改善临床结果。

3. 下一步研究指导和方法

进一步的研究应侧重于比较各种手术技术的 RCT 研究，以获得更有力的证据； 应考虑全国各地环境、人群和实验室条件的差异，多中心研究应包括不同地区的中心。

参考

参与本指南修订讨论的专家

黄国宁重庆市妇产科医院

郑州大学第一附属医院孙英普

孙海祥南京大学医学院附属鼓楼医院

刘平 北京大学第三医院

中山医科大学附属第一医院 徐艳文

孙正义 北京协和医院

黄元华海南医学院

浙江大学医学院附属金帆妇产科医院

雷劲，华中科技大学同济医学院附属同济医院，武汉

田立北京大学人民医院

康悦凡 福建省妇幼保健院

施娟子陕西省妇幼保健院

刘丽英沉阳市妇婴医院

贵阳医学院附属医院周从容

刘瑞芝 吉林大学白求恩第一医院

钱小桥江苏省人民医院

内蒙古医学院附属医院陈秀娟

新疆医科大学胡贝尔第一附属医院

江西省新彩林妇幼保健院

中英成都晋江区妇幼保健院

滕晓明 上海市第一妇婴医院

东红广西医科大学

灵歌中信湘雅生殖遗传医院

李永刚云南省第一人民医院

兰州大学第一医院薛士龙

马学功 青海省人民医院

张爱君 上海交通大学医学院附属瑞金医院

郑州大学第一附属医院辛志敏

杜永瑞天津中心妇产医院

方聪中山大学附属第六医院

周 安徽医科大学第一附属医院

胡蓉宁夏医科大学总医院生殖医学中心

曾勇深圳市中山泌尿外科医院

河北医科大学第二医院赵志明

吴雪清山西省妇幼保健院辅助生殖中心

段金良解放军第181医院

山东大学附属吴克良生殖医院

李磊 四川大学华西第二医院

指南审查员

黄国宁重庆市妇产科医院

郑州大学第一附属医院孙英普

孙海祥南京大学医学院附属鼓楼医院

刘平 北京大学第三医院

中山医科大学附属第一医院 徐艳文

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